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一种简易的植物组织表面消毒装置
A Simple Device for Surface Sterilization of Plant Tissues
张宇薇2,杨预展2,袁志林1, 2, *,潘雪玉3,秦媛4
1林木遗传育种国家重点实验室,中国林业科学研究院,北京;2中国林业科学研究院亚热带林业研究所,杭州;3中国林业科学研究院热带林业研究所,广州,广东;4中国科学院遗传与发育生物学研究所,北京
*通讯作者邮箱:yuanzl@
摘要:本装置利用七根玻璃管和铜网来提高植物的表面消毒效果。解决传统方法的处理样品量较少,处理样品种类不多,操作方法不够简便而耗时多等技术问题;大大提升了处理多个不同种样品的效率,增加了表面消毒所需药品的利用率,提高了空间利用率,减少了样品损失且使表面消毒更彻底。
关键词:植物组织;表面消毒;简易装置
材料与试剂
1.玻璃管:7个;上下端口均不封口;内径2.5 cm,外径3 cm,高16 cm
2.外容器:内径13 cm,外径14 cm,高18 cm,容量1.85 L
3.铜网:圆形;直径15 cm,目数为20 目
4.橡皮筋
5.橡皮塞(规格:大口*小口*高度(mm):26*19*28)
6.无菌滤纸
7.镊子
8.剪刀
9.标签纸
10.无菌水
11.75%乙醇
12.2%次氯酸钠
13.90%乙醇
仪器设备
1.超净工作台
实验步骤
一、表面消毒简易装置的组装
1.七个玻璃管1的上端开口均通过橡皮塞5进行对应的密封 (如图1B)。
2.所有玻璃管1排列成图1D所示,然后通过橡皮筋4捆扎成束,下端开口处通过一张铜网3 (如图1C)进行统一捆扎封底 (如图1A)。
3.将玻璃管束置入外容器2内 (如图1D)。
图1. 表面消毒简易装置的组装
二、三种实际操作方式
1.准备四个本实用新型装置的外容器2的操作过程 (如图2所示):
图2 实际使用时的一种示意图
1.1将样品用无菌水清洗,分拣并修剪好,用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品),在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签,以橡皮筋4将七根玻璃管1固定好;
1.2在四个外容器2中分别加入75%乙醇,2%次氯酸钠,90%乙醇和无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准);
1.3手持玻璃管束 (七根玻璃管1),将其浸入75%乙醇中,浸泡30~60 s,期间以手将玻璃管束提起放下2~3次,然后用无菌水冲洗2~3次;
1.4将玻璃管束转移到装有2%次氯酸钠的外容器2中,浸泡6~10 min,期间以手将玻璃管束提起放下数次;
1.5将玻璃管束转移到装有90%乙醇的外容器2中,浸泡30~60 s,期间以手将玻璃管束提起放下2~3次;
1.6将玻璃管束转移到装有无菌水的外容器2中,更换三次无菌水,取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。
2.准备一套本实用新型装置的操作过程 (如图3所示):
2.1将样品用无菌水清洗,分拣并修剪好,用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品),在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签,以橡皮筋4将七根玻璃管1固定好;
2.2在外容器2中都加入75%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),将玻璃管束浸入75%乙醇中,浸泡30~60 s,期间以手将玻璃管束提起放下2~3次,然后用无菌水冲洗2~3次;
图3 实际使用时的另外一种示意图
2.3将外容器2中液体更换为2%次氯酸钠 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min,期间以手将玻璃管束提起放下数次;
2.4将外容器2中液体更换为90%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min,期间以手将玻璃管束提起放下数次;
2.5将外容器2中液体更换为无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),更换三次无菌水,取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。
3.准备四套本实用新型装置的操作过程 (如图4所示) (可根据实验的需要可以自行增加本实用新型装置的套数):
3.1将样品用无菌水清洗,分拣并修剪好,用镊子将样品放入玻璃管1内 (一套装置可放入一种或七种以下的植物样品),在玻璃管1对应的橡皮塞5上贴上写有样品名称或编号的标签,以橡皮筋4将玻璃管1每七个一组固定成束;
3.2在四个外容器2中都加入75%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),将四组玻璃管束浸入75%乙醇中,浸泡30~60 s,期间以手将每组玻璃管束提起放下2~3次,然后用无菌水冲洗2~3次;
3.3将四个外容器2中液体都换做2%次氯酸钠 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),令玻璃管束在外容器2中浸泡6~10 min,期间以手将各组玻璃管束提起放下数次;
3.4将四个外容器2中液体都换做90%乙醇 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),将四组玻璃管束浸入90%乙醇中,浸泡30~60 s,期间以手将每组玻璃管束提起放下2~3次;
3.5将四个外容器2中液体都换做无菌水 (加入的量以没过玻璃管1内的样品为准),更换三次无菌水,取出玻璃管束后将玻璃管束放在无菌滤纸上控干多余水分。
图4 实际使用时的再一种示意图
结果与分析
1.传统方法 (如图 5所示) 与使用本装置进行表面消毒所用时间做了对比。结果如下表:可知该表面消毒的简易装置大大提升了处理不同种样品的效率 (表1)。
表1. 传统方法与使用本装置进行表面消毒所用时间的对比表
注:
1.每种样品的量按本实用新型装置所能容纳的最大容量来计;
2.操作方式三按四套本实用新型装置的饱和容量计,即处理的样品量四倍于其他方式。
图5 传统方法步骤示意图
致谢
感谢基本科研业务费项目“筛选新型植物耐盐真菌及制剂创新的关键技术问题研究”(编号: RISP005, -)对本研究的大力支持。
参考文献
1.袁志林,潘雪玉,秦媛. 植物组织表面消毒的简易装置[P]. 浙江: CN205093317U, -03-23.
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