题记：免疫学是一门经验性学科，很多时候，理论知识经不起实验的检验。
相关背景
我们都知道，测抗体的方法有多种多样，比如：双抗原夹心法、间接法、中和试剂竞争法、阻断法等，但是普遍认为，最常用以及最靠谱的是双抗原夹心法。这里简单介绍下双抗原夹心法，其他测抗体方法自己百度一下。双抗原夹心法是指板上包被抗原，酶为标记抗原，两个抗原中间夹着抗体，形成夹心。这种夹心形式类似于双抗体夹心，但是结构不同，同样的，双抗原夹心也需要用到抗原配对。到这里，大家应该基本知道了原理。那进入我们本次的实验，本次实验目的在于开发一个乙肝表面抗体（HBsAb）试剂盒。
相关材料准备
包被抗原：板1；板2
标记抗原：酶1；酶2；酶3
实验过程
首先我要测一下，这6组配对，测人血清的结果，看看准确度怎么样，参加本次实验的，还有某上市试剂盒，结果如下图：
看上去，我们的6组配对，值都偏低，阴阳性不容易判断出来，于是乎，我们调整包被浓度与酶浓度，以最简单的测试方法，挑选1例阳性血清，进行稀释拉梯度，并于上市试剂盒进行对比，结果如下图：
效果很明显，配对板1酶3、板2酶3与上市试剂盒测得值非常接近，于是我们选取了这两组配对进行后续实验，以调整后的板浓度、酶浓度，再次测一批人血清，并于上市试剂盒进行对比，结果又来了，如下图：
一眼望去，阴阳性符合率，甚至是OD值都基本相近，于是我们以OD值进行相关性分析。
板1酶3与上市试剂盒相关性如下图：
板2酶3与上市试剂盒相关性如下图：
两组阴阳性符合率相关性都达到0.95以上了，已经是很完美的了。
然后我们认为找到了一组非常好的配对，高兴的不得了。
正准备进行性能评估，实验室进行了一轮全部项目同源性测试，我突发奇想，双抗原夹心也可以参与同源性测试，这一测，不得了，我对于双抗原夹心没有好感了！哈哈。开个玩笑，我们直接上数据，如下图：
从数据可以看出，人血清和兔血清，我们的配对都能应付，羊血清勉强应付，但是这个鸡血清，谁来给解释一下，这是怎么回事？我们的配对为什么会跟鸡血清交叉这么严重？
至此，这个项目又卡住了，那么好，我们在回头研究下之前的数据，有一个细节，或许大家和我一样，忽略了，就是我们有6组配对，在经过板浓度与酶浓度调整之后，砍掉了四对，保留了2对，我们再回顾下刚才砍掉的数据：
有没有发现什么问题？另外四组配对很相似，而且如果把板1酶3或板2酶3第一个点加到这四组前面，是不是这四组梯度和这两组一样，也就是说，这四组配对很可能只是线性范围比这两组宽，测血清的准确度，有没可能更好？终于又有了新的希望，这四组配对能否解决这个鸡血清的问题，还有待进一步实验，至此，实验结束。
讨论
我们常常鼓励实验技术人员要反复看自己做过的实验，做过的数据，只有反反复复的看，才会发现新的问题，说不定还会有新的思路。双抗夹心法，值得深入研究，因为涉及的问题太多了，我们还只是测了兔子、羊、鸡这些动物血清，还有很多其他动物，所以试剂盒开发没有那么简单，要反复论证，反复实验，里面的门道真的很多，免疫学是一门经验性学科，很多时候，理论知识经不起实验的检验。
如果大家有什么新的思路，可以留言哦，我们有条件的，都会第一时间安排上实验，并第一时间分享出来，大家一起学习讨论，助力我们国家的免疫学科研。
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